12位固相萃取裝置是一種樣品前處理技術(shù)，它是由液固萃取柱和液相色譜技術(shù)相結(jié)合發(fā)展而來(lái)的。主要用于樣品的分離、純化和濃縮。與傳統(tǒng)的液-液萃取方法相比，可以提高分析物的回收率，更有效地將分析物與干擾成分分離，減少樣品預(yù)處理過(guò)程，省時(shí)省力。
那么如何操作12位固相萃取裝置呢？
1、選擇SPE小柱或?yàn)V膜
首先，根據(jù)待測(cè)樣品的性質(zhì)，選擇保留能力強(qiáng)的固定相。如果待測(cè)樣品帶負(fù)電，可以使用陰離子交換填料，否則，可以使用陽(yáng)離子交換填料。如果是中性分析物，可以用反相填料進(jìn)行萃取。SPE小柱或過(guò)濾器的尺寸和規(guī)格應(yīng)取決于樣品中分析物的濃度。對(duì)于低濃度的體內(nèi)樣品，一般使用盡可能少的固定相填料來(lái)提取更大體積的樣品。
2、激活
萃取前，用裝滿(mǎn)小柱的溶劑沖洗小柱或用5-10ml溶劑沖洗濾膜，以保持SPE填料濕潤(rùn)，因?yàn)樘盍系母稍飼?huì)降低樣品保留值，以及每個(gè)小柱的干燥程度也會(huì)影響恢復(fù)。率再現(xiàn)性。先用甲醇等水溶性有機(jī)溶劑沖洗填料，因?yàn)榧状伎梢詽?rùn)濕吸附劑表面并滲透到非極性硅膠鍵合相中，使硅膠更容易被水潤(rùn)濕；然后加入水或緩沖液沖洗，創(chuàng)造與樣品溶劑兼容的環(huán)境并提高回收率。
3、上樣
一般可以采用四種方法：
(1)用0.1mol/L酸或堿調(diào)節(jié)pH<3或pH>9，離心提取上層；
(2)用甲醇、乙腈等沉淀蛋白質(zhì)，取上清，用水或緩沖液稀釋?zhuān)缓筇崛。?/div>
(3)用酸或無(wú)機(jī)鹽沉淀蛋白質(zhì)，取上清液，調(diào)整pH值，然后提取；
(4)超聲15分鐘后，加水和緩沖液，提取上清液。流速應(yīng)控制在1ml/min，過(guò)快的流速不利于分析物與固定相的結(jié)合。
4、沖洗
反相SPE的清洗溶劑多為水或緩沖液，清洗液中可加入少量有機(jī)溶劑、無(wú)機(jī)鹽或pH值。小柱中加入的清洗液不應(yīng)超過(guò)一根小柱的體積，SPE濾膜為5-10ml。
5、洗脫
應(yīng)選擇5-10ml離子強(qiáng)度較弱但能洗掉分析物的洗脫溶劑。如果需要更高的靈敏度，可以將洗脫液蒸干，然后在進(jìn)樣前用流動(dòng)相將殘留物復(fù)溶。體內(nèi)樣品洗脫后含水，可冷凍干燥。保留能力弱的SPE填料可以用小體積、弱洗脫液清洗分析物，然后用C18柱等極性強(qiáng)的HPLC分析柱對(duì)洗脫液進(jìn)行分析。如果分析物可以被離子化，則調(diào)節(jié)pH值以抑制樣品的離子化以增強(qiáng)分析物在反相SPE填料中的保留，在洗脫過(guò)程中調(diào)節(jié)pH值使其離子化并用較弱的溶劑洗脫，收集然后調(diào)整洗脫液的pH值，以在HPLC分析中實(shí)現(xiàn)更好的分離。在洗脫過(guò)程中，應(yīng)降低流速，使用兩次小體積洗脫代替一次大體積洗脫，以提高回收率。
更新時(shí)間：2022-07-26 
瀏覽次數(shù)：517
新聞資訊
我的位置：