PCR(聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng))是利用DNA在體外攝氏95°高溫時(shí)變性會(huì)變成單鏈，低溫(經(jīng)常是60°C左右)時(shí)引物與單鏈按堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則結(jié)合，再調(diào)溫度至DNA聚合酶適反應(yīng)溫度(72°C左右)，DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補(bǔ)鏈。
基因擴(kuò)增PCR儀的本質(zhì)是體外核酸擴(kuò)增，加熱使雙鏈DNA解開(kāi)螺旋，在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物，重復(fù)“變性→退火→引物延伸”過(guò)程至25～40個(gè)循環(huán)，呈指數(shù)級(jí)擴(kuò)大待測(cè)樣本中的核酸拷貝數(shù)。PCR擴(kuò)增時(shí)加入的引物利用熒光素進(jìn)行標(biāo)記，使引物和熒光探針同時(shí)與模板進(jìn)行特異性結(jié)合，擴(kuò)增結(jié)果通過(guò)熒光信號(hào)采集系統(tǒng)實(shí)時(shí)采集信號(hào)并輸送到計(jì)算機(jī)分析處理系統(tǒng)，實(shí)時(shí)輸出量化結(jié)果。
傳統(tǒng)儀器只能夠定性地分析是否存在目標(biāo)片段。但是價(jià)格要低很多，而且運(yùn)行成本也要低很多。不過(guò)不能直接得到擴(kuò)增結(jié)果，還需要做電泳檢測(cè)。實(shí)際中檢測(cè)遺傳疾病，品種分子標(biāo)記篩選，甚至親自鑒定等都可以由它完成。
但是，某些需要定量的實(shí)驗(yàn)就必須用到實(shí)時(shí)定量PCR了。比如檢測(cè)某些病原物的數(shù)量(血液乙肝病毒復(fù)制程度)，特定基因的表達(dá)量(比如結(jié)合反轉(zhuǎn)錄做的RNA定量分析)，某些基因在染色體組中拷貝數(shù)(以前往往使用southern blot技術(shù))等等?；驍U(kuò)增PCR儀一般不需要對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行電泳分析，操作相對(duì)簡(jiǎn)單些，但是耗材實(shí)在是貴。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，看有沒(méi)有用傳統(tǒng)儀器，看有多少用熒光定量PCR。傳統(tǒng)儀器只能擴(kuò)增，不能檢測(cè)，便宜?；驍U(kuò)增PCR儀除了擴(kuò)增，還能在擴(kuò)增的同時(shí)檢測(cè)DNA發(fā)出的熒光信號(hào)，試劑和儀器都更貴。
更新時(shí)間：2022-10-10 
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